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HABA

2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoic acid

アビジンビオチン結合のアッセイに用いられる色素。HABA/アビジン複合体の500nmの吸光度の変化を滴定に利用する。

Name HABA1)
MW 242.2301 g/mol
Formula C13H10N2O3
XLogP 2.3

PubChem image 5357439

滴定の例

アビジン濃度の決定方法

  1. アビジン溶液に2当量以上のHABAを添加する。
    → 500nmの吸収増大。
  2. ビオチンを一定量(たとえば0.1当量)ずつ添加していく
    → ビオチンがHABAを追い出すので500nmの吸収が減少する。
  3. 500nmの吸収をプロットする。
  4. 吸収の減少がなくなるまで2~3を繰り返す。
    →吸収が減少しなくなったところのビオチン量がアビジン量として計算できる。
  • ※ビオチン溶液濃度を正確にするため、ストック溶液は大きなスケールで調製(100mLとか500mLとか)
  • ※HABA濃度はそれほど正確でなくてもいいが、アビジンの結合サイトを飽和させなければいけない。

Reference